Proyectos
BIOTRANSFORMACIÓN DE COMPUESTOS ORGÁNICOS MEDIANTE EL HONGO FITOPATÓGENO COLLETOTRICHUM ACUTATUM - OBTENCIÓN DE PRECURSORES VERSÁTILES PARA EL DISEÑO DE SUSTANCIAS QUÍMICAS DE INTERÉS COMERCIAL
Resumen
Las biotransformaciones, son un campo emergente de la ciencia que emplea catalizadores biológicos, por ejemplo células completas y enzimas, para realizar reacciones químicas. En la última década este campo ha recibido un interés renovado y actualmente, se ha constituido en una de las áreas más promisorias para la futura investigación científica, debido a su aplicabilidad para la obtención de materias primas y productos, útiles en diferentes procesos industriales y en sectores tan trascendentes como el farmacéutico, el químico y el agrícola; de ahí que en el mundo se destinen altas inversiones para su desarrollo. La importancia en el uso de los sistemas biológicos para la síntesis de sustancias orgánicas, tales como precursores sintéticos y moléculas bioactivas, está principalmente relacionado con la preparación de compuestos óptimamente activos (enantiopuros), bajo condiciones suaves y amigables con el ambiente, a través de procesos reconocidos por su elevada estereoselectividad; la cual difícilmente puede ser reproducida por métodos de síntesis química. Adicionalmente, las biotransformaciones se han usado para efectuar modificaciones de grupos funcionales aquirales en sustratos de origen exógeno, tanto sintéticos como naturales; ya que dichos procesos se pueden llevar a cabo a temperatura ambiente y presión atmosférica, evitándose con ello el uso de condiciones de reacción extremas que pueden conducir a la formación de productos secundarios. Entre los organismos que más se han explorado en el ámbito internacional por su capacidad transformadora, se destacan por su eficiencia los hongos fitopatógenos pertenecientes al género Colletotrichum (especialmente C. gloeosporioides y C. lini). Las especies de este género, además de poseer la habilidad natural de transformar compuestos presentes en las plantas, tanto en su proceso de colonización (por ejemplo, terpenos, coumarinas, estilbenos y flavonoides) como para hacer frente a los mecanismos de defensa del huésped (detoxificación de fitoalexinas), también pueden metabolizar algunas sustancias xenobióticas, tales como pesticidas y colorantes, entre otros. No obstante esta evidencia, en nuestro país, estos microorganismos se han estigmatizado por sus efectos nocivos en la agricultura y han sido estudiados estrictamente desde la perspectiva de su control, desconociéndose su potencialidad para la realización de modificaciones químicas. Un ejemplo particular de lo anterior lo constituye la especie C. acutatum; la cual, a pesar de estar ampliamente difundida en nuestro país y poseer una alta capacidad para infectar (causando la antracnosis) y transformar los metabolitos presentes en múltiples hospederos a través de su sistema enzimático, no posee ningún estudio referente a su habilidad para llevar a cabo procesos de biotransformación. Consecuente con estos antecedentes, consideramos que el estudio de las biotransformaciones realizadas por la especie del género Colletotrichum, C. acutatum, es una aproximación novedosa y pertinente para el desarrollo de alternativas en la obtención de materias primas de interés comercial y moléculas bioactivas, a partir de sustratos económicos disponibles comercialmente. Estas biotransformaciones pueden, así mismo, ser aprovechadas para el desarrollo de métodos nuevos y eficientes que permitan la obtención de precursores químicos, a través de rutas sucintas y de bajo impacto ambiental, las cuales pueden ser llevadas a cabo a través de una amplia gama de reacciones químicas caracterizadas por su quimio-, regio- y estereoselectividad, como acontece con C. gloeosporioides y C. lini. En este sentido, nuestro grupo ya ha obtenido resultados preliminares positivos con esta especie, encontrando que C. acutatum posee una alta capacidad para modificar sustratos con naturaleza análoga a los fenilpropanoides, mediante reacciones de oxidación, reducción, esterificación, entre otras. Dichos resultados ameritan entonces, emprender estudios más profundos y detallados que involucren aspectos analíticos y estructurales, métodos más precisos y confiables, y que posibiliten un mayor conocimiento del proceso para convertir esta potencialidad en una realidad. En particular, se desea evaluar la capacidad del hongo fitopatógeno Colletotrichum acutatum para realizar modificaciones estructurales sobre sustratos arilpropanoide, tales como anetol, estragol, 2-alilfenol, 2-propenilfenol, alcohol cinamílico, ácido cinámico, 4-metoxifenilacetona. La selección de los materiales de partida obedece al hecho de que poseen estructuras simples con funcionalidades químicas diferentes pero muy difundidas en los productos naturales, amplia distribución en la naturaleza (muy generalizada en los aceites esenciales), y variada aplicación en la industria de los saborizantes y fragancias. Estas características sumadas al bajo costo y disponibilidad, convierten a los fenilpropanoides en plantillas ideales para la obtención de varios productos de importancia comercial mediante biotransformación, los cuales podrían ser catalogados como ''naturales'', aportándoles mayor aceptación en el mercado que sus contrapartes sintéticas. De acuerdo con nuestros planteamientos, el enfoque metodológico proyecta inicialmente la evaluación de la toxicidad de los sustratos contra C. acutatum utilizando el método de la placa perforada, con el objeto de determinar la concentración mínima inhibitoria que puede ser empleada para el proceso de biotransformación. De esta manera, se pretende establecer una concentración del arilpropanoide que ''estrese'' al hongo y lo obligue a metabolizar rápidamente los sustratos, pero que no cause su muerte. Posteriormente, se llevará a cabo la biotransformación de los sustratos con el hongo fitopatógeno a pequeña escala y se determinarán mediante métodos cromatográficos convencionales (cromatografía de capa fina, CCF; cromatografía líquida de alta eficiencia, HPLC y/o cromatografía de gases acoplada a espectrometría de masas, CG-EM), las variaciones en la concentración de los materiales de partida y/o los productos metabólicos en el curso del tiempo. Con la información obtenida se construirán las respectivas curvas del progreso de la biotransformación, a partir de las cuales será posible determinar tanto los períodos de tiempo óptimos que garanticen una elevada conversión de los sustratos como también los intervalos requeridos para la formación de un producto determinado y las posibles rutas metabólicas llevadas a cabo por C. acutatum. Por último se realizará una biotransformación preparativa (proceso a mayor escala) para los diferentes sustratos, de manera que se pueda aislar y purificar una cantidad adecuada de los productos metabólicos mayoritarios que permita su caracterización por técnicas espectroscópicos convencionales (espectroscopía ultravioleta/visible, espectroscopía Infrarroja, espectroscopía de resonancia magnética nuclear, espectrometría de masas); este conocimiento estructural posibilitará el desarrollo de alternativas que permitan optimizar a posteriori el proceso de biotransformación y separación de los metabolitos. Así mismo suministrará información sobre la aplicación potencial de los productos como precursores sintéticos y/o moléculas bioactivas.
Convocatoria
Nombre de la convocatoria:CONVOCATORIA DIME AÑO 2007-2008
Modalidad:MAYOR CUANTÍA
Responsable