Mycobacterium tuberculosis (Mtb) es el agente etiológico de la tuberculosis (TB), una enfermedad infectocontagiosa que afecta principalmente los pulmones. Actualmente se estima que ¼ de la población mundial está infectada con TB latente, donde no se presentan manifestaciones clínicas ni se transmite la enfermedad. Sin embargo, la TB latente es reversible y en casos de inmunosupresión puede progresar a TB activa, generando así nuevas fuentes de trasmisión. Las estrategias actuales para la prevención y el control de la TB no son suficientes para lograr su erradicación. La aparición de cepas multi-fármacorresistentes y extremadamente-fármaco-resistentes (MDR-TB y XDR-TB, respectivamente), la coinfección VIH/TB y la pandemia del COVID-19 han contribuido a la alta incidencia de la enfermedad. Por este motivo, de acuerdo con la Organización Mundial de Salud (OMS) en su proyecto “End TB”, existe la necesidad de desarrollar nuevas herramientas con el objetivo de interrumpir la transmisión de la TB y así lograr su erradicación. Una de las estrategias de mayor interés es el desarrollo de una vacuna anti-TB que muestre mayor eficacia en comparación con la única vacuna autorizada para prevenir la TB, conocida como Bacillus Calmette-Guérin (BCG). Entre los nuevos candidatos vacunales, se destacan las cepas vivas atenuadas debido a su amplio repertorio antigénico y su capacidad para promover respuestas de memoria prolongadas. En este sentido, comprender los mecanismos moleculares que le permiten a la bacteria ser un patógeno intracelular exitoso permite la identificación de blancos de atenuación alternativos para el diseño y construcción de cepas mutantes de Mtb como posibles candidatos vacunales. Algunos estudios han demostrado que existen proteínas transportadoras transmembranales con funciones imprescindibles para la supervivencia de las micobacterias durante el proceso de infección, entre ellos, las ATPasas Tipo P. Estas bombas se encargan del transporte activo de iones metálicos, manteniendo de esta forma una adecuada homeostasis iónica celular, siendo esto necesario para equilibrar la alta concentración de iones metálicos al interior de Mtb como consecuencia del ambiente intrafagosomal. Por su parte, otros transportadores se encargan de translocar los componentes estructurales desde el citosol hacia la pared celular, ayudando a la construcción de la compleja envoltura celular que caracteriza a Mtb, como es el caso de las proteínas MmpL encargadas del transporte de lípidos. En un trabajo previo realizado en nuestro grupo de investigación “Bioquímica y Biología Molecular de las Micobacterias (BBMM)”, se construyó y caracterizó genotípicamente un doble mutante de Mtb en las proteínas transmembranales CtpF y MmpL7 implicadas en transporte de Ca2+ y el lípido dimicocerosato de tiocerol (PDIM), un conocido factor de virulencia, respectivamente. En el presente proyecto se evaluará el efecto de la deleción conjunta de los transportadores CtpF y MmpL7 de Mtb mediante la comparación de la proliferación intracelular de la cepa doble mutante (MtbH37Rv∆ctpF∆mmpL7Δhyg) con respecto a la cepa parental (MtbH37Rv) y las cepas mutantes sencillas (MtbH37Rv∆ctpFΔhyg y MtbH37Rv∆mmpL7Δhyg) en un modelo in vitro de infección de macrófagos alveolares murinos. Estos ensayos de infección in vitro constituirán un primer acercamiento al estudio preclinico de la posible atenuación de la cepa doble mutante como potencial vacuna viva y los resultados darán paso a futuros ensayos en modelos in vivo.