La producción de ß-lactamasas de es el principal mecanismo de resistencia a los antibióticos ß-lactámicos en bacterias Gram negativas. La diseminación de cefotaximasas (CTX-M) entre especies de la familia Enterobacteriaceae a nivel mundial, ha mostrado un importante incremento desde 1995. De acuerdo con el grado de similitud en la secuencia, esta familia de ß-lactamasas de espectro extendido (BLEE) se subdivide en cinco grupos, dentro de los cuales el mayor número de variantes se encuentran clasificadas dentro del grupo CTX-M-1. Esta familia de ß-lactamasas se caracteriza por su actividad preferente hacia cefotaxima, sin embargo, sustituciones puntuales en regiones específicas de la proteína pueden afectar su perfil de actividad e inclusive conferirle una mayor actividad frente a otras cefalosporinas de tercera generación. En Colombia solo se ha reportado la enzima CTX-M-12 (del grupo CTX-M-1), aunque estudios preeliminares realizados por nuestro grupo de investigación sugieren la presencia de otras cefotaximasas asociadas al grupo CTX-M-1 que se han relacionado con brotes epidémicos en otros continentes. Con este proyecto se busca identificar variantes de genes de cefotaximasas asociados al grupo CTX-M-1 en aislamientos de Enterobacterias procedentes de doce hospitales pertenecientes a la red pública adscrita a la Secretaria Distrital de Salud de Bogotá D.C. Para este fin se estandarizará una metodología basada en las técnicas de PCR y SSCP (Single Strand Conformational Polimorphysm) que permita realizar la diferenciación de variantes de genes que codifican para estas cefotaximasas. Mediante esta metodología, previa amplificación del gen mediante PCR, es posible detectar mutaciones a nivel de DNA hasta en una base, y se fundamenta en que las estructuras conformacionales que adquieren las hebras de DNA de cadena sencilla pueden ser separadas mediante electroforesis en geles de poliacrilamida no desnaturalizante. Estas estructuras conformacionales son dependientes de secuencia razón por lo cual es posible discriminar variantes de acuerdo al perfil electroforético obtenido. Mediante esta metodología se analizarán los aislamientos considerados en el presente estudio y las variantes se clasificarán de acuerdo a su perfil electroforético. La identidad del gen correspondiente a cada uno de los perfiles obtenidos se determinará mediante la secuenciación del producto amplificado por PCR. Estos resultados serán correlacionados con los puntos isoeléctricos obtenidos y con información de susceptibilidad obtenidos previamente en el laboratorio Dentro de los resultados que se esperan obtener con este proyecto, se destaca el desarrollo e implementación de una metodología que permita identificar nuevas variantes de genes de cefotaximasas CTX-M, la cual se dará a conocer a la comunidad científica para que pueda ser empleada en posteriores estudios epidemiológicos. También se pretende reportar la presencia de los genes de cefotaximasas presentes en aislamientos de Enterobaceterias que no han sido reportados en el territorio nacional, así como su importancia e impacto en la comunidad. Esta información es gran importancia para el fortalecimiento de las políticas de prevención, control y vigilancia epidemiológica con las cuales se busca no solo mitigar los costos en los tratamientos, sino también reducir el impacto y los riesgos para la población vulnerable.