Las Repeticiones Palindrómicas Cortas Agrupadas y Regularmente Interespaciadas (CRISPR) junto con sus endonucleasas asociadas (Cas), constituyen una herramienta molecular programable que permite modificar de manera precisa el genoma de cualquier organismo. Para esto, se requiere la formación de un complejo ribonucleoproteico compuesto de un ARN guía cuya secuencia complementaria al gen de interés, dirige a la proteína Cas9 para cortar el ADN en ambas cadenas. Este sistema ha permitido identificar la funcionalidad de genes en diversos organismos, incluyendo patógenos como Leishmania braziliensis, agente etiológico de la leishmaniasis, enfermedad de relevancia en la salud pública de países tropicales como Colombia. Contra este parásito no se dispone de vacunas y los tratamientos actuales producen graves efectos secundarios, la baja adherencia de los pacientes al tratamiento y el reciente reporte de fenotipos resistentes del patógeno. Por esto, resulta necesario identificar nuevas dianas terapéuticas mediante estudios de caracterización molecular y bioquímica. En Colombia aún no se han reportado estudios que utilicen el sistema CRISPR/Cas9 para el estudio de Leishmania. En consecuencia, se propone implementar este sistema en promastigotes de L. braziliensis, aportando un enfoque innovador desde la modificación dirigida de genomas para su caracterización molecular y la búsqueda de nuevas dianas terapéuticas. Específicamente, se propone desarrollar herramientas relacionadas con tal sistema, incluyendo la producción de anticuerpos policlonales anti-Cas9 en modelos aviares (IgY), la estandarización de la actividad nucleasa de la proteína Cas9-6xHis in vitro y la implementación del sistema in vivo en L. braziliensis. El desarrollo de este proyecto conducirá hacia la innovación biotecnológica enfocada en el manejo de enfermedades parasitarias como la leishmaniasis, puesto que se estandarizará el sistema CRISPR/Cas9 para alterar su genoma, resultando de gran interés para Colombia.