La leishmaniasis es una enfermedad parasitaria cuyos nuevos casos oscilan entre 700.000 y 1 millón cada año a nivel mundial. La enfermedad es causada por diversas especies de parásitos del género Leishmania, siendo L. amazonensis y L. braziliensis las especies con mayor distribución en Colombia. Actualmente, no se dispone de vacunas para humanos y los tratamientos farmacológicos utilizados se caracterizan por sus múltiples efectos secundarios, la baja adherencia de los pacientes al tratamiento y el reciente reporte de fenotipos resistentes del patógeno. En este sentido, se requiere la búsqueda e implementación de nuevos fármacos que contribuyan a resolver la enfermedad sin afectar al paciente. Una fase fundamental en el estudio de nuevos fármacos implica evaluar su actividad en células invadidas por el parásito. Esta evaluación se realiza mediante ensayos de infección in vitro, utilizando macrófagos y promastigotes cultivados en el laboratorio. Una vez establecida la infección, se evalúa la actividad biológica de los fármacos, verificando la carga parasitaria post-tratamiento, mediante tinción celular y conteo microscópico y/o lisis celular y cultivo de los parásitos remanentes, entre otros métodos. Aunque los ensayos de infección in vitro han resultado esenciales para la evaluación de nuevos medicamentos, en la actualidad se requieren ensayos aún más confiables, reproducibles y rápidos que permitan monitorear en tiempo real la actividad biológica de los fármacos y sus efectos sobre el parásito en el contexto de células infectadas. En consecuencia, en el presente proyecto se plantea la utilización de parásitos de L. braziliensis fluorescentes, previamente obtenidos en nuestro grupo de investigación, los cuales expresan constitutivamente la proteína verde fluorescente (GFP, por sus siglas en inglés), para realizar ensayos de infección in vitro. Dicha estrategia no requiere métodos de marcaje o cultivo celular para detectar el patógeno una vez finalizado el tratamiento farmacológico, al ser las muestras inherentemente fluorescentes. Por lo tanto, la carga parasitaria se determina analizando la fluorescencia del sistema de infección in vitro. Las principales ventajas asociadas con la implementación de células fluorescentes para establecer este tipo de ensayos incluyen la alta sensibilidad -innata a los métodos fluorescentes-, la eliminación de pasos de marcaje o cultivo celular post-tratamiento y la posibilidad de monitorear en tiempo real el efecto de los compuestos de interés durante el transcurso del ensayo mediante análisis de imágenes de fluorescencia. La presente propuesta constituye un modelo que innovará metodologías de investigación en el ámbito de la evaluación de fármacos contra la leishmaniasis, resultando de gran interés biotecnológico y médico para Colombia. El sistema de infección in vitro a desarrollar podrá ser aprovechado potencialmente por otros investigadores que trabajan en la búsqueda de nuevas moléculas con actividad biológica para la leishmaniasis.