Introducción. Las células madre se caracterizan por su capacidad de autorrenovación, diferenciación multilinaje y su efecto paracrino. Las células madre mesenquimales (MSCs) son células multipotenciales de tipo adulto localizadas en múltiples tejidos como el adiposo y la médula ósea. Se ha demostrado ampliamente su utilidad en la terapia celular y la medicina regenerativa. Una de las alternativas más prometedoras en este campo es el uso de los factores paracrinos secretados por las células madre (secretoma), los cuales estimulan la regeneración celular, la angiogénesis y disminuyen la inflamación y otros mecanismos involucrados en el proceso de reparación tisular. La obtención de estos factores en los medios de cultivo brinda la oportunidad de establecer medios condicionados para su uso en terapia celular y medicina regenerativa. Los cultivos primarios de las células madre mesenquimales se ven limitados principalmente por el tiempo de vida media de las células, el desarrollo de senescencia después de 20-30 duplicaciones de la población y cambios en la expresión génica con disminución en la tasa de proliferación a medida que se aumentan los subcultivos. Medios condicionados obtenidos a partir de estos subcultivos, pueden presentar variabilidad e implican obtención constante de muestras y la renovación periódica del cultivo primario. Una alternativa para resolver estos problemas, es la generación de líneas celulares de MSCs, que acopladas a un sistema de cultivo dinámico, permitan la obtención consistente y a una mayor escala, de medios condicionados para la realización de estudios in vitro e in vivo y su eventual aplicación terapéutica. Objetivo. Comparar tanto cualitativa como cuantitativamente, el secretoma angigénico, como un parámetro de analisis del secretoma de líneas celulares y cultivos primarios de células madre mesenquimales derivadas de tejido adiposo humano, cultivadas en monocapa y en cultivos dinámicos 3D, para evaluar la viabilidad de establecer un sistema que permita optimizar la obtención de medios condicionados para aplicaciones terapéuticas. Metodología. Se propone una metodología basada en la experiencia de protocolos desarrollados por el Grupo de Investigación y la asesoría del Grupo de Investigación sobre Telómeros y Senescencia Celular del Instituto Curie, Paris, Francia, para la generación de líneas celulares de MSC y que incluye las siguientes etapas: • Procesamiento de tejido para obtener células madre mesenquimales derivadas de tejido adiposo humano (A-MSCs). • Desarrollo de cultivos primarios en monocapa y en sistema dinámico (spinner flask acoplado a microtransportadores). • Caracterización y comparación de las A-MSCs de cultivos primarios (monocapa y de sistema dinámico) en cuanto a: viabilidad, tasa de proliferación, capacidad de diferenciación multilinaje. • Generación de líneas celulares de A-MSCs mediante la transducción lentiviral del gen de la telomerasa humana (h-TER). • Desarrollo de cultivos dinámicos de las líneas celulares de A-MSCs y caracterización de estas células en cuanto a: viabilidad, tasa de proliferación, capacidad de diferenciación multilinaje. • Análisis cualitativo y cuantitativo de los medios condicionados obtenidos de A-MSCs de cultivo primario y de las líneas celulares en sistemas dinámicos, mediante la cuantificación de 43 factores angiogénicos, como un parámetro de evaluación de su secretoma. Resultados esperados. 1. Que las condiciones de cultivos dinámicos no generen cambios significativos en el secretoma de líneas de A-MSCs. 2. Disponer de una fuente homogénea y permanente de medios condicionados obtenidos mediante el cultivo dinámico de líneas inmortalizadas A-MSCs.