Introducción. Las células madre mesenquimales (MSCs) son células de tipo adulto que pueden obtenerse de diversos tejidos como médula ósea, pulpa dental, ligamento periodontal, tejido adiposo, estroma y sangre de cordón umbilical, entre otros. Las MSCs se caracterizan por su capacidad de autorrenovación, diferenciación multilinaje, inmunomodulación y su efecto paracrino. Este último efecto, es el resultado de la producción y liberación al medio extracelular de factores tróficos solubles denominados en conjunto el secretoma. Se ha planteado que el empleo de medios condicionados (medios de cultivo ricos en las sustancias secretadas por las MSCs) podría reproducir los efectos benéficos del trasplante celular en la regeneración-reparación de los tejidos. Los estudios realizados por nuestro Grupo de Investigación Biología de Células Madre, comparando el efecto del trasplante de las MSCs derivadas de tejido adiposo (A-MSC) versus la aplicación de los medios condicionados han mostrado resultados satisfactorios: los medios condicionados favorecen la recuperación motora en ratas con lesión medular y mejoran el proceso de cicatrización de heridas cutáneas. También han demostrado mayor capacidad de inducción de la regeneración ósea, tanto en animales como en humanos, sin evidencia de efectos adversos locales o sistémicos. Para alcanzar el objetivo de emplear los medios condicionados con carácter terapéutico en humanos, es indispensable el desarrollo de estudios preclínicos; sin embargo, esto hace necesario cambiar el sistema de cultivo en monocapa por cultivos dinámicos para producir los volúmenes de medios condicionados necesarios para realizar este tipo de investigaciones. Por lo tanto, el siguiente paso en el desarrollo de nuestra línea de investigación es el escalonamiento de la producción de medios condicionados en sistemas dinámicos utilizando como estrategia el cultivo en frascos tipo spinner flasks acoplados a microportadores. Una vez estandarizadas las condiciones de cultivo en este sistema, se realizarán los siguientes controles para monitorear la calidad de los medios condicinados producido bajo estas condiciones: 1. Patrones de crecimiento de las A-MSCs en este sistema 2. Conservación de sus características inmunofenotípicas y capacidad de diferenciación multilinaje 3. Características del secretoma y cambios cualitativos y/o cuantitativos en comparación con resultados de estudios previos de cultivos en monocapa, reportados por nuestro Grupo de Investigación. En la literatura se han decrito más de 200 factores tróficos presentes en el secretoma de las A-MSCs. El análisis completo de este secretoma es por lo tanto muy complejo. Por esta razón, en trabajos previos de nuestro Grupo de Investigación, hemos utilizado la estrategia de analizar el sectretoma angiogénico, no solo por su importancia dentro del proceso de reparación, sino también como un indicador de las características del secretoma bajo diferentes condiciones experimentales. Objetivo. Desarrollar la primera fase del proceso de escalonamiento para la producción de medios condicionados de células madre mesenquimales derivadas de tejido adiposo humano en cultivos dinámicos con spinner flasks acoplados a microportadores. Metodología • Generación y mantenimiento de cultivos dinámicos. • Caracterización de las A-MSCs obtenidas en este sistema de cultivo en cuanto a: viabilidad celular, tasa de crecimiento, inmunofenotipo y capacidad de diferenciación multilinaje. • Evaluación y comparación de los medios condicionados obtenidos en el cultivo monocapa versus los obtenidos en el sistema dinámico. Resultados esperados. Desarrollar un protocolo de cultivo dinámico de células madre mesenquimales derivadas de tejido adiposo (A-MSCs) que permita conservar el inmunofenotipo, el potencial de diferenciación multilinaje y las características de su secretoma.