Proyectos
DETERMINACIÓN DE LA INTERACCIÓN DEL ROTAVIRUS WTI-5 CON LAS PROTEÍNAS CELULARES Hsp 70 Y Hsp 90 EN LINEAS TUMORALES
Resumen
--Las proteínas de choque térmico (HSPs) han sido propuestas como marcadores de células tumorales, debido que tienen expresión diferencial respecto a las células normales y proporcionan mecanismo de proliferación y viabilidad a la célula tumoral (1,2). En este sentido, las HSPs pueden convertirse en blancos ideales que ofrecen ventajas al virus para entrar, replicarse o lisar la célula tumoral. Se ha reportado proteínas que posibilitan la entrada de los rotavirus a la célula como integrinas, PDIs, y la proteína de choque térmico Hsc70. Adicionalmente, se generaron aislados rotavirales, como WT1-5, infectando células tumorales que expresan alto contenidos de HSPs (3,4). Luego se comparó la infección del rotavirus replicado en las células tumorales respecto a la cepa viral parental y se observó un aumento considerable de la infección del WT1-5 replicado en las líneas tumorales. WT1-5 infecta células normales sometidas a choque térmico y que sobre-expresan HSPs en membrana y no infecta células sin estrés térmico. Al incubar con las células con choque térmico con anticuerpos anti-HSPs, la infección disminuye considerablemente. Esto sugiere que las HSP participan durante el proceso de entrada de WT1-5 a la célula. Sin embargo, se requiere corroborar la interacción de las HSPs de membrana citoplasmática con WT1-5. Para esto, primero se analizará la expresión de las HSPs en la membrana de las líneas tumorales mediante citometria de flujo. Luego, se evaluará la interacción entre WT1-5 y las proteínas de choque térmico Hsp70, Hsp90 celulares incubando WT1-5 con las células en presencia o ausencia de anti-HSPs. La interacción se evaluará mediante la técnica de ELISA de captura y co inmunoprecipitación. Se incubará WT1-5 con las células durante 1h a 4°C, las células se lavarán para retirar el virus no unido y se adicionará HSPs solubles completas para evaluar si las HSPs compiten con las HSPs celulares y esto afecta la infección, que se evaluará mediante inmunocitoquímica. Igualmente, se incubará WT1-5 con proteínas Hsp70 o Hsp90 solubles y la interacción se evaluará mediante ELISA de captura, inmunodot o “Virus Overlay Protein Binding Assay” (VOPBA) (5)
Convocatoria
Nombre de la convocatoria:CONVOCATORIA NACIONAL JÓVENES INVESTIGADORES E INNOVADORES 2015 - COLCIENCIAS
Modalidad:CONVOCATORIA NACIONAL JÓVENES INVESTIGADORES E INNOVADORES 2015 - COLCIENCIAS
Responsable