Contexto: La generación de Anticuerpos Anti-Insulina (AAI) se ha descrito como un evento adverso secundario a la administración de Insulina Exógena (IE). Dichos AAI se han asociado con alteraciones en la seguridad-eficacia de la IE, sin embargo en la práctica clínica, cuando la terapia falla, se modifica aumentando la dosis o sustituyendo la formulación, sin que dicha conducta se soporte en la evidencia de la aparición de AAI. Objetivos: Producir AAI en conejos para cuatro formulaciones de IE, con el fin de analizar su cinética, determinar el reconocimiento frente a la formulación con la cual fue inmunizado cada individuo, así la reactogenicidad cruzada frente a las otras tres moléculas de IE, mediante un ensayo de ELISA. Además se pretende correlacionar la presencia de los AAI con parámetros bioquímicos relevantes en Diabetes (glicemia, insulinemia y proteínas totales). Materiales y métodos: Se inmunizaron cuatro conejos Nueva Zelanda hembras, cada uno con una IE diferente (Cristalina, NPH, Glargina y recombinante humana), con un esquema de inmunización que contempló 6 aplicaciones. Para la detección y caracterización de los sueros se usó la técnica de ELISA indirecta y los datos obtenidos se correlacionaron con los valores de glicemia, insulinemia y proteínas totales. Resultados: Bajo el esquema de inmunización utilizado, se estimuló la producción de AAI, estableciendo su cinética de generación, lo cual permitió, el reconocimiento por el antígeno hasta en una dilución de 1/ 8000 para las insulinas Cristalina y Glargina y de 1/2000 para la insulina NPH. A nivel de la técnica, se definieron las condiciones óptimas para su desarrollo, que permitieron detectar AAI y evidenciar un reconocimiento diferencial, pero no selectivo. En cuanto al análisis de parámetros bioquímicos la presencia de AAI se correlacionó con hipoglicemia en la post-tercera inmunización. Conclusiones: Se logró la producción de sueros anti-insulina exógena en conejos, lo que permitió estandarizar la técnica de ELISA, con la cual se determinó la reactogenicidad específica y cruzada entre cuatro formulaciones de IE. La evidencia experimental permite sugerir el uso este protocolo para la detección de AAI en el marco de los análisis de eficacia/seguridad de IE, administradas a pacientes diabéticos.