Proyectos
Evaluación del efecto de la separación sobre algunos parámetros de función celular
Resumen
A pesar de la utilización amplia de métodos de separación celular, su impacto sobre función no ha sido estudiado en detalle. Los campos de fuerza empleados para efectuar separación alteran propiedades celulares que pueden ser difíciles de medir. Las células responden a estrés mecánico con cambios rápidos en propiedades eléctricas de su membrana por activación de canales iónicos sensibles a estiramiento y/o cizallamiento (flujo) y con cambios en cascadas de señalización, expresión de moléculas de adhesión y regulación génica (1). Nuestros datos muestran que exposición de macrófagos a flujos bajos de 1-4ml/min a través de una celda de separación hidrodinámica produce despolarización celular e incremento en corrientes iónicas de salida (2). Si la separación hidrodinámica que utiliza fuerzas de baja magnitud genera cambios significativos en propiedades eléctricas de la membrana celular, ¿cuál es el efecto que la separación con fuerzas de mayor magnitud tiene sobre función celular?. Proponemos estudiar 2 modelos celulares en cultivo: una línea celular (macrófagos J774A.1) y un cultivo primario de reticulocitos humanos. J774A.1 al ser una línea celular presenta menor variabilidad entre células y no requieren separación de otras células dando un grupo control negativo no sometido a ningún procedimiento de separación celular. Los reticulocitos humanos son glóbulos rojos inmaduros, anucleados, presentes en circulación periférica que permiten establecer un cultivo primario sin necesidad de disociación mecánica o química a partir del tejido de origen; se trata de células expuestas fisiológicamente a estrés mecánico y distintas velocidades de flujo. Estas células serán sometidas a 3 métodos de separación diferentes: separación hidrodinámica por imponer fuerzas pequeñas de separación y menor estrés mecánico, centrifugación por ser la técnica más ampliamente utilizada que utiliza fuerzas de mayor magnitud e impone mayor estrés mecánico y un método de separación basado en afinidad (método inmunomagnético) porque además de la fuerza aplicada (campo magnético) utiliza la unión de anticuerpos monoclonales contra antígenos celulares específicos, permitiendo estudiar el efecto de la unión de tales anticuerpos a la superficie celular.
Convocatoria
Nombre de la convocatoria:CONVOCATORIA: "APOYO DE LA DIB A TESIS DE INVESTIGACIÓN EN POSGRADOS" - CUARTO CORTE
Modalidad:Modalidad 1: Apoyo a proyectos de tesis y trabajos de investigación.
Responsable