En la búsqueda de nuevas vacunas que permitan prevenir la TB se han empleado varias estrategias, entre ellas, como lo recomendado por la WHO, el diseño y obtención de mutantes atenuados ha despertado mucho interés, toda vez que este tipo de cepas muestra la ventaja de una mayor estimulación de la respuesta inmune, al tratarse de una bacteria viva atenuada. Una vez inoculadas en el individuo, las vacunas vivas tienen la posibilidad de seguir replicándose (Hernández Pando et al., 2006), por lo tanto, las bacterias vivas atenuadas poseen las características fenotípicas inmunodominantes de la bacteria silvestre, imitando al máximo el proceso de infección natural. En este sentido, para el caso de Mycobacterium tuberculosis (Mtb) es muy relevante en una vacuna viva la presencia de antígenos inmunomodulantes ampliamente conocidos como ESAT6, CFP10, Ag85, MPB64, MPB70 y MPB83, entre otros. La comprensión de los procesos biológicos que conllevan a la supervivencia del bacilo tuberculoso en condiciones de infección es crítica en el desarrollo de mutantes atenuados de Mtb. Varias investigaciones han demostrado la importancia de las proteínas de membrana para la supervivencia del bacilo tuberculoso. En los últimos años se ha conocido que la deleción de transportadores de membrana ATPasas tipo P, afecta la homeostasis de cationes y su translocación a través de la membrana de Mtb, afectando así su capacidad para responder a las condiciones presentes en el ambiente intrafagosomal y con esto afectando también su capacidad para producir daños en los tejidos pulmonares (Botella et al., 2011; Novoa-Aponte & Soto Ospina, 2014; Raimunda et al., 2014; Ward et al., 2010; Maya et al. 2022). Por otra parte, también es muy bien conocido que proteínas transmembranales transportadoras como las MmpL, se destacan por su participación en la translocación y biosíntesis de lípidos como PDIM, un reconocido factor de virulencia que ha sido asociado con virulencia del bacilo tuberculoso en condiciones de infección agudas y con capacidad de resistencia a condiciones de estrés (Jackson et al., 2007). Nuestro grupo de investigación (BBMM) ha trabajo los últimos 15 años en demostrar que la deleción y sobreexpresión de los transportadores ATPasas tipo P de Ca2+ y/o Cu2+ afecta los sistemas de obtención de nutrientes y los mecanismos de desintoxicación del bacilo tuberculoso (Leon-Torres, 2018; León-Torres et al., 2015; López et al., 2018; Novoa Aponte, 2016; Novoa-Aponte et al., 2012; Pulido et al., 2014). Nuestros trabajos han permitido demostrar que la deleción de ATPasas tipo P, generan un desbalance en el transporte de iones, afectando el potencial electroquímico y mecanismos de detoxificación, que por ser procesos vitales comprometen la supervivencia del bacilo y por tanto podrían también afectar la progresión de la infección, lo que ha contribuido a posicionar a las ATPasas tipo P, como blancos muy interesantes de atenuación. Específicamente hemos podido demostrar que la deleción de la ATPasa tipo P transportadora de Ca2+ de la membrana plasmática, CtpF, afecta la virulencia del bacilo tuberculoso (Maya, 2021), y probablemente algo similar podría suceder si interrumpimos el transporte de Cu2+ mediado por la ATPasas tipo P de membrana CtpA (Tesis de Doctorado en marcha). Al mismo tiempo, hemos desarrollado los útiles génicos para poder mutar el gen MmpL7 (transportador de PDIM) en cepas de Mtb previamente mutadas en ATPasas tipo P, además de herramientas para para la eliminación de marcadores de resistencia antibiótica en mutantes construidos mediante recombinería (Vásquez Godoy, 2021). Por todo lo expresado anteriormente, el presente proyecto plantea construir una cepa atenuada de Mtb delecionada en los genes ctpF y mmpL7, lo que correspondería entonces a un doble mutante atenuado con una mínima capacidad de recuperar naturalmente su virulencia, que podría ser utilizado como candidato de estudio en fases preclínicas como posible vacuna anti-TB.