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Caracterización de una Na+ ATPasa tipo P de Mycobacterium tuberculosis y evaluación de su actividad bajo condiciones de estrés
Resumen
La tuberculosis (TB) es una enfermedad infecciosa que representa uno de los más importantes desafíos para la salud pública en el mundo. Actualmente hay una prevalencia de 2 billones de personas infectadas con Mycobacterium tuberculosis, lo que representa el 30% de la población mundial, y junto al VIH/SIDA son las enfermedades que causan el mayor número de muertes por agentes infecciosos a nivel mundial. En su reporte mas reciente la Organización Mundial de la Salud (WHO, 2008) revela que 9,4 millones de personas se infectan cada año con M. tuberculosis. Una característica clave de la infección mediante el bacilo tuberculoso, es la inhibición de la fusión fagosoma–lisosoma que da origen al fagolisosoma, el destino normal de microorganismos y partículas externas (Dubnau, 2003). La capacidad que tiene el bacilo tuberculoso de sobrevivir dentro de un fagosoma es vital para su patogenicidad. El transporte iónico es un aspecto importante para la fisiología de la interacción hospedero – patógeno al estar posiblemente implicado en la supervivencia de la micobacteria en el fagoslisosoma. El estudio de las proteínas de membrana involucradas en el transporte iónico podría contribuir a la comprensión del parasitismo intracelular y aportar nuevas herramientas para el diseño de drogas antituberculosas. Las Na+ ATPasas tipo P son enzimas de intercambio catiónico reportadas inicialmente en eucariotas superiores, específicamente tejidos diferenciados de cangrejos, truchas y ratones, además de protozoos como Trypanosoma cruzi y Leishmania amazonenzis ( Lizumi, 2003, De Souza 2007). La función de esta ATPasa en estos organismos puede estar relacionada con el control del volumen celular o la generación de gradientes de Na+. Se conocen pocos reportes acerca de la presencia de Na+ ATPasas tipo P en procariotes, los cuales se han encaminado a organismos alcalófilos y halotolerantes (Koyama, 1999, Ueno 2000, Watanabe 1999 y Shono 1995). A pesar de que en el genoma de M. tuberculosis existen 28 secuencias que codifican para transportadores putativos de iones metálicos, no se conocen estudios en los que se caracterice experimentalmente la actividad de tales transportadores en Mycobacterium, a excepción de datos funcionales relacionados con la familia de Proteínas de Resistencia Natural Asociada al Macrófago, NRAMP (Agranoff, et al 1998). Por esta razón en el presente trabajo se pretende caracterizar la actividad Na+ ATPasa tipo P en vesículas de membrana plasmática de M. smegmatis y M. tuberculosis H37Ra, así como determinar los efectos que las condiciones de estrés como hipoxia e inanición, similares a lo que tiene que enfrentar la micobacteria como respuesta del sistema inmune tengan sobre la actividad Na+ ATPasa de las micobacterias. Finalmente, se buscará identificar cual de las 28 secuencias reportadas es la que codifica para la Na+ ATPasa tipo P para fines de clonación y caracterización futura de la proteína recombinante
Convocatoria
Nombre de la convocatoria:CONVOCATORIA: "SEMILLEROS DE CREACIÓN E INVESTIGACIÓN DE LA DIB" DE LA DIRECCIÓN DE INVESTIGACIÓN DE BOGOTÁ -PRIMER CORTE
Modalidad:Modalidad 1: Apoyo a trabajos de investigación o creación en el país. PRIMER CORTE
Responsable