La necesidad de fuentes de cepas de levaduras nativas y adecuadas a sustratos locales para la producción sostenible de etanol, comprende un proceso de selección bioquímico y molecular muy importante, entre los cuales se encuentra el de la diferenciación de cepas. El proyecto propuesto se basa en diferenciar levaduras nativas aisladas y seleccionadas de muestras ambientales de Colombia, con lo que se evitará tener el mismo tipo de levadura para posteriores ensayos enmarcados dentro del proyecto de investigación. Se pretende utilizar la técnica de RFLP (Restriction Fragment Length Polymorphism), que se basa en el corte con enzimas de restricción de secuencias específicas de ADN, dando como resultado fragmentos de ADN que varían de un individuo a otro y que permiten de esta forma obtener un patrón de huella molecular individual para cada tipo de cepa. La enzima de restricción a usar debe caracterizarse por interactuar con un gran número de sitios de restricción en el ADN genómico y muy pocos en el ADN mitocondrial (mtADN), de forma a obtener un patrón de huella molecular visible correspondiente únicamente para el mtADN y tener un criterio claro para la diferenciación de las levaduras. Los objetivos del proyecto de Trabajo de Grado propuesto se encuadran dentro de un objetivo específico del proyecto “Aislamiento, caracterización y evaluación de levaduras nativas del municipio de Puerto López (Meta) para la producción de etanol” en el cual participan la Universidad Nacional de Colombia, Ecopetrol y Colciencias.