Giardia intestinalis (o Giardia lamblia) es un parásito protozoo intestinal causante de la giardiasis, una patología con alta prevalencia en Latinoamérica, Asia y África (200 millones de casos anuales, OMS). Esta enfermedad se caracteriza por una absorción deficiente de nutrientes en el intestino, pérdida severa de electrolitos y retraso en el crecimiento. Además de su importancia clínica y en producción animal, este parásito reviste especial interés biológico por su posición evolutiva basal y metabolismo simplificado, el cual ha sido poco estudiado. Una de las rutas metabólicas más importantes y conservadas es la biosíntesis del Dinucleótido de Adenina y Nicotinamida (NAD) y del Dinucleótido de Adenina y Nicotinamida fosforilado (NADP). Los dinucleótidos de piridina NAD y NADP son indispensables para el funcionamiento normal de las células ya que participan en procesos fundamentales del metabolismo celular, e.g. en la producción energética y en la señalización celular. El NAD es ampliamente conocido como coenzima en múltiples reacciones redox y como sustrato en la síntesis de agentes movilizadores de Ca2+, procesos de reparación del ADN y silenciamiento genético. Así mismo, la forma fosforilada NADP es considerada el principal poder reductor de la célula siendo una molécula esencial en las síntesis reductivas y en la defensa frente al estrés oxidativo (Berger, 2004). Dada la importancia de estas moléculas a nivel celular, existen varias rutas para su biosíntesis, las cuales convergen en el paso catalizado por las enzimas Nicotinamida/Nicotinato Mononucleotido Adenilil Transferasa NMNAT (EC 2.7.7.1/18) y NAD Quinasa (EC 2.7.1.23). Nuestro grupo de investigación (laboratorio de investigaciones básicas en bioquímica – LIBBIQ), enfocado en el estudio del metabolismo energético de parásitos de impacto médico, ha encontrado mediante herramientas bioinformáticas una nueva isoenzima de la NMNAT (Buitrago, 2008) y una secuencia putativa para la NAD Quinasa en Giardia intestinalis (Jutinico, 2012) (GlNMNAT-B y GlNADK, respectivamente), cuyas identidades se verificaron inicialmente in silico. Posteriormente, las regiónes codificantes se amplificaron mediante PCR y se clonaron en vectores de expresión. Las proteínas recombinantes expresadas, His-GlNMNAT-B y His-GlNADK, se purificaron mediante cromatografia de afinidad y se utilizaron para la ejecución de ensayos enzimáticos, cuyos resultados se evaluaron mediante C18-HPLC, verificándose las actividades de adenilil transferasa y kinasa. Este proyecto tiene como propósito profundizar en el estudio de estas enzimas fundamentales, mediante la determinación de su localización intracelular.