Mycobacterium tuberculosis es el principal agente causante de la tuberculosis en humanos, enfermedad que causa aproximadamente 1,3 millones de muertes por año. Según las cifras suministradas por la Organización Mundial de la Salud (OMS) en el año 2010 se presentaron casi 9 millones de casos de infección con tuberculosis, de los cuales se reportaron 1,5 millones de muertes, incluyendo pacientes coinfectados con VIH. Según esta organización, la tuberculosis se mantiene como la segunda causa de muerte por enfermedades infecciosas en el mundo, después del VIH [WHO, 2011]. Este bacilo infecta al hospedero por vía aérea y rápidamente encuentra los macrófagos alveolares donde se establece y comienza un proceso de proliferación facilitado por la capacidad de la micobacteria de impedir la acidificación de los fagosomas y, así, evitar la formación del fagolisosoma en donde las enzimas proteolíticas serían activadas [Kusner, 2005; Crowle, et al, 1991; Sundaramurthy, 2007]. Una vez la infección ha sido establecida y se ha generado una respuesta inmune para controlar el patógeno, la tuberculosis puede entrar en un estado latente, etapa en la cual no se transmite la enfermedad [Parrish, et al., 1998]. Al entrar en estado de latencia, la micobacteria sufre cambios fenotípicos, especialmente a nivel de pared bacteriana, que producen un efecto en el perfil de resistencia a los antibióticos. Lo anterior unido a la aparición de cepas de micobacteria multirresistentes a los compuestos antituberculosos (MDR-TB) y, especialmente cepas extremadamente resistentes a los antibióticos (XDR-TB), hacen necesario la búsqueda de nuevas dianas terapéuticas que lleven al diseño de compuestos antituberculosos efectivos en los dos casos mencionados. Dentro de las posibles opciones, se resalta la importancia de las ATPasas tipo P no solo por su especial contribución al mantenimiento del equilibrio iónico en el interior bacteriano, sino por sus posibles implicaciones en la regulación de procesos claves para la supervivencia y la proliferación de patógenos infecciosos dentro del ambiente hostil del hospedero. Los efectos de alteraciones en el funcionamiento de estas proteínas tienen implicaciones que dependen del tipo de ión transportado. A pesar de sus niveles intracelulares bajos, el Ca2+ juega un papel muy importante en procesos bacterianos relevantes, tales como el mantenimiento de la estructura celular, la motilidad, quimiotaxis, diferenciación y el ciclo celular. Entre los organismos procariotas los niveles intracelulares de Ca2+ son controlados estrictamente, a tal punto que la concentración citoplasmática de este ion es 1000 veces menor que en el exterior celular. Así, la alteración del gradiente de Ca2+ se convierte en una manera de activar diversos procesos de señalización en el interior bacteriano los cuales son capaces de censar la concentración de este ion y producir un efecto fisiológico. En el genoma de M. tuberculosis se han reportado 12 genes codificantes de ATPasas tipo P para los cuales no se ha estudiado su especificidad y contribución a la homeostasis iónica a través de la membrana. Tal número de este tipo de transportadores es el máximo presentado por bacteria alguna, lo cual podría indicar la importancia de estas proteínas transmembranales para la versatilidad requerida por la micobacteria durante la infección. Estudios bioinformáticos realizados con anterioridad en nuestro grupo de investigación han permitido proponer uno de estos marcos de lectura (ctpH) como el posible codificante de una Ca2+-ATPasa tipo P. Este transportador no solo tendría importancia para la micobacteria en el mantenimiento del gradiente de iones calcio a través de la membrana, sino que también jugaría un papel relevante en la supervivencia del bacilo tuberculoso en las condiciones adversas a las que se somete durante el proceso de infección, especialmente si se refiere al pulmón, en donde las concentraciones de Ca2+ podrían llegar a ser de 10mM. La definición de la especificidad de la proteína codificada por el gen Rv0425c (ctpH) requiere del aislamiento de la misma. Para lo anterior se plantea la sobreexpresión en E. coli del gen codificante y la purificación de la misma mediante cromatografía de afinidad. Teniendo en cuenta que la función de esta proteína involucra dos procesos íntimamente ligados, como son la hidrólisis de ATP y el transporte neto de carga a través de la membrana, la caracterización in vitro de este sistema será realizada mediante la detección de la actividad ATPasa dependiente de la concentración de iones Ca2+ en vesículas de membrana plasmática de M. tuberculosis H37Ra y la medición del transporte específico de Ca2+.