Proyectos
RELACION DE LAS PROTEINAS QUINASAS ACTIVADAS POR MITOGENO (MAPK) CON EL EFECTO DEL LPS DE E. coli SOBRE LA ABSORCION INTESTINAL DE L-LISINA EN LECHONES RECIEN DESTETADOS
Resumen
El sistema de producción de cerdos no sólo ha avanzado en la obtención de líneas genéticas precoses con mejores índices de conversión de alimento, sino también hacia la obtención de animales destetados a edades mas tempranas. Como resultado al momento del destete, los lechones son menores y poseen el sistema digestivo poco desarrollado, haciéndolos más susceptibles a problemas digestivos en el periodo posdestete, lo que conlleva a una menor utilización de los alimentos (Touchette et al., 2002). Además, el lechón al momento del destete no tiene su sistema inmunológico totalmente desarrollado, siendo más sensible a infecciones que traen como consecuencia la aparición de problemas nutricionales y fisiológicos, capaces de perturbar la función normal del aparato digestivo y promover la aparición de diarreas. De otro lado, la selección genética para la obtención de animales mucho más magros propicia un aumento de los requerimientos de lisina del cerdo. Sin embargo, los efectos del medio y la presencia de estrés (principalmente enfermedades infecciosas) usualmente limitan la capacidad productiva, debido a que afectan la absorción de lisina, disminuyendo la síntesis de proteína corporal, y por ende, el crecimiento (Moberg, 2000; Blecha, 2000). Cuando el lechón está en etapa de lactancia las bacterias dominantes en el estómago e intestino delgado suelen ser lactobacilos y estreptococos, sin embargo, el destete brusco induce la mortalidad de dichas bacterias debido a la ausencia de sustrato, provocando la proliferación de otra flora bacteriana intestinal como E. coli que al aumentar su población tiende a aumentar la liberación de productos proinflamatorios de las bacterias muertas como los lipopolisacáridos (LPS); además, el destete induce cambios importantes en la estructura intestinal, que conllevan a la interrupción en su capacidad funcional, cuya recuperación total, eficiente y apropiada puede llevar varias semanas (van Beers-Schreurs, 1996; Pluske et al., 1997). El LPS es un marcador molecular asiciado a patógenos (PAMM) y es un producto marcador de sepsis que es reconocido por cualquier hospedero mamífero como una entidad patogénica importante. La administración de LPS de E. coli es uno de los modelos más empleados en estudios de procesos infecciosos agudos, ya que tiene acciones altamente reproducibles y carece de los efectos secundarios asociados a las infecciones crónica. Una vez que se inicia la cascada de reacciones que conducen a un estado séptico, sobreviene una respuesta sistémica no regulada que puede progresar a fallo orgánico múltiple. Debido a lo anterior es de gran importancia conocer las implicaciones de estos PAMM sobre los mecanismos de transporte, absorción y metabolismo del aminoácido limitante en depósito de tejido magro en cerdos que es la L-lisina en lechones recién destetados. El trabajo de campo se realizará en el Centro de Producción San Pablo, perteneciente a la Universidad Nacional de Colombia, Sede Medellín. Se utilizarán 15 lechones resultado del cruce alterno Duroc x Landrace destetados a los 21 días de edad, con un peso aproximado de 6 kg. Los lechones se alojarán individualmente en jaulas independientes. A las dietas se les adicionará LPS a una concentración de 3 µg/ml. Se sacrificarán 5 lechones los días 0, 2 y 7 posdestete, 2.5 horas después de su última comida. Luego se colocarán en posición de decúbito dorsal para la extracción completa del yeyuno, el cual será cortado en 7 fragmentos iguales. Para mantener el tejido intestinal en óptimas condiciones durante los procesos experimentales, se utilizará solución Ringer. Cada fracción de yeyuno será introducida en un medio de incubación al que se le adicionará L-lisina a concentración 5 mM, así como losl correspondientes inhibidores de las MAPK a distintas concentraciones (10, 20 y 50 mM). Los medios de incubación serán reservados para tomar de ellos muestras de 200 µl para así determinar la concentración inicial de L-lisina y para la determinación de la concentración de L-lisina acumulada en el tejido. El contenido de L-lisina se analizará por cromatografía de líquidos de alta resolución (HPLC) (AOAC, 2000). Los tratamientos están constituidos por una (DC) dieta control (sin adición de LPS ni inhibidores de MPAK), por una (DCLPS) DC mas la adición de LPS (sin adición de inhibidores de MAPK), y por seis DCLPS a las que se les adicionará uno de los dos inhibidores de las MAPK a diferentes concentraciones (10, 20 y 50 mM). En el experimento se utilizará un diseño factorial de 8X3 (8 tratamientos por tres mediciones en el tiempo posdestete), donde cada uno de los tratamientos será asignado aleatoriamente a cada uno de los fragmentos de yeyuno (Tratamientos 2-8), y cada tratamiento tendrá un total de 4 repeticiones (Steel and Torrie, 1980). El yeyuno del animal del tratamiento testigo (Tratamiento 1), servirá como referencia del funcionamiento intestinal sin inflamación. Los datos obtenidos se analizarán utilizando el procedimiento GLM del paquete estadístico SAS. La comparación de medias entre tratamientos se realizará por la prueba de Tukey y la tendencia de la respuesta (lineal o cuadrática) a través de contrastes ortogonales.
Convocatoria
Nombre de la convocatoria:CONVOCATORIA NACIONAL DE INVESTIGACIÓN 2009
Modalidad:MODALIDAD II. APOYO A TRAVÉS DE PROYECTOS DIRIGIDO A GRUPOS DE INVESTIGACIÓN EN CONSOLIDACIÓN, CLASIFICADOS EN CATEGORÍA “C”, RECONOCIDOS Y REGISTRADOS EN EL SISTEMA NACIONAL DE CIENCIA Y TECNOLOGÍA A LA FECHA DE APERTURA DE ESTA CONVOCATORIA.
Responsable