La resistencia que presentan los microorganismos a los medicamentos puede ser de dos tipos: la resistencia intrínseca (natural), relacionada con la capacidad natural de los organismos para resistir a la quimioterapia inicial y la resistencia adquirida que se presenta cuando un organismo es inicialmente sensible a un medicamento y después de la exposición a éste se vuelve resistente al tratamiento . En el caso del parásito T. cruzi se ha informado la presencia de parásitos con resistencia natural a los dos medicamentos utilizados para el tratamiento de la enfermedad de Chagas: el benznidazol (Bz) y el nifurtimox (Nfx). Esta resistencia ha sido detectada en 27% de los aislmientos con diferentes orígenes geográficos y biológicos. Tambien se ha encontrado que es posible inducir resistencia cuando parásitos sensibles son sometidos a presiones continuas de Nfx y Bz. Esta ha sido atribuida a la pérdida de los genes que codifican para nitroreductasa I (NTR I) y/o a mutaciones puntuales en estos genes. No obstante en los genomas de parásitos con resistencia natural los genes que codifican para NTR I no presentan alteraciones. Con el animo de determinar cuales son los genes difrentes a NTR I involucrados en los mecanismos de resistencia natural de T. cruzi al tratamiento con Bz se planteó una propuestas de investigación que hace uso de las nuevas metodologías que permiten hacer el tamizaje general de los genes expresados (transcriptoma) diferencialmente entre las poblaciones sensibles y naturalmente resistentes. Mediante este análisis diferencial de transcriptoma hemos identificado una lista de genes candidatos a ser evaluados, experimentalmente, con el animo de proponer mecanismos de resistencia. La evaluación funcional de genes en Trypansoma cruzi presenta limitaciones experimentales dadas por el tiempo de crecimiento de los parásitos, la baja eficiencia de transfección y el hecho de manipular un organismo peligroso que requiere condiciones de cultivo de categoría de riesgo III. Los niveles de sintenia entre Trypanosoma brucei y Trypanosoma cruzi, son altos y el porcentaje de identidad entre los dos genomas es del 57%. En experimentos anteriores hemos demostrado que al silenciar proteínas endógenas de Trypanosoma brucei (mediante RNAi ) la función perdida por el silenciamiento se recupera cuando el parásito expresa el gen ortologo de T. cruzi. Las ventajas de manipulación en el laboratorio que ofrece el parásito Trypanosoma brucei, son: • El tiempo de crecimiento en cultivo (6 horas para forma sanguínea) • La eficiencia de transfección. • No es patógeno para humanos (manipulación en un laboratorio de riesgo II). • En Trypanosoma brucei se ha evidenciado la existencia de un robusto sistema de silenciamiento mediado por RNA de interferencia (RNAi), del cual se ha sacado gran provecho experimental. Se presenta un propuesta de estudio experimental de los genes de T. cruzi presuntamente implicados en la resistencia natural al Bz, haciendo uso del modelo de T. brucei. Para ello, silenciaremos los genes ortólogos en T. brucei mediante un vector de interferencia inducible modulado por el “ Tetracycline Response Element” (TRE). Esto nos permitirá adelantar pruebas farmacológicas de resistencia al fármaco en presencia del gen y una vez se ha inducido su silenciamiento, para establecer su posible papel en el fenotipo resistente. Simultáneamente adelantaremos pruebas de localización intracelular de la proteína codificada por estos genes tanto en T. brucei como en T. cruzi. Los ensayos de localización nos permitirán determinar si estamos ante genes ortólogos cuyos productos conservan la localización celular e inferir un algun grado de similitud funcional