La tuberculosis (TB) es una enfermedad infecciosa considerada la principal causa de muerte por un agente de origen bacteriano, y la segunda enfermedad infecciosa más mortífera, después de COVID-19. Su agente etiológico, Mycobacterium tuberculosis (Mtb), es un bacilo aerobio ácido-alcohol resistente (BAAR) que presenta pared celular rica en ácidos micólicos asociados a la resistencia de la bacteria a antibióticos y sus mecanismos de defensa frente al sistema inmune (Dorronsoro, I. et al., 2007). Actualmente la única vacuna disponible contra la TB es la cepa atenuada de M. bovis conocida como Bacillus Calmatte-Guérin (BCG), la cual presenta eficacia limitada para casos de infección en adultos (Pai, M., et al., 2016). Por tal motivo, la tuberculosis sigue representando un desafío significativo para la salud pública en todo el mundo. Esto se debe a su alta incidencia persistente, el surgimiento de cepas de Mycobacterium tuberculosis multirresistentes a fármacos (MDR) y, más preocupante aún, extremadamente resistentes (XDR). La coexistencia de la TB con el VIH también complica su manejo y tratamiento, exacerbando aún más la carga sobre los sistemas de salud global. Considerando lo anterior, la búsqueda de dianas de atenuación para el diseño racional de mutantes atenuados con potencial vacunal contra la tuberculosis ha despertado el interés de estudiar las ATPasas tipo P de Mycobacterium tuberculosis. Dentro de estas 12 proteínas transportadoras de cationes de Mtb se destaca CtpH, que media el transporte de Ca2+ para mantener la homeostasis de este metal en la membrana y se destaca por su papel en la supervivencia de Mtb durante procesos de infección (Novoa, L., et al., 2012). En estudios previos realizados en nuestro grupo de investigación Bioquímica y Biología Molecular de las Micobacterias (BBMM) se determinó que el gen ctpH se sobreexpresa en condiciones de infección en macrógafos humanos y la deleción de este gen disminuye la viabilidad del bacilo tuberculoso en ambientes con concentraciones tóxicas de los iones calcio y sodio, así como especies generadoras de estrés oxidativo y nitrosativo respecto a la cepa sin deleción. Además, mediante análisis de expresión génica se ha determinado que ctpH desempeña un papel fundamental al respaldar la actividad de otras Ca2+-ATPasas como ctpF (Maya, M. et al., 2019). Por lo tanto, este proyecto tiene como objetivo complementar la cepa de Mycobacterium tuberculosis (Mtb) que presenta una mutación en el gen ctpH utilizando un sistema de integración sitio específica, con el fin de evaluar si se recupera el fenotipo silvestre. Este enfoque permitirá determinar el papel de CtpH para la homeostasis iónica celular y como posible objetivo para la atenuación, crucial en el diseño de candidatos vacunales contra la tuberculosis.