La Leishmaniasis, es una enfermedad parasitaria causada por un protozoario perteneciente al género de Leishmania. Actualmente, la leishmaniasis es considerada una enfermedad tropical desatendida y un problema de salud pública, impactando desfavorablemente la salud y calidad de vida en varios países en vía de desarrollo. En Colombia, uno de los países endémicos con más cantidad de especies del parásito circulantes, la enfermedad afecta a población vulnerable, entre ellos comunidades que viven en zonas rurales aisladas en estado de pobreza y personal militar. El tratamiento de primera línea son los antimonios pentavalentes (SbV), de los cuales hay dos diferentes formulaciones, Pentostam® (estibogluconato de sodio) y Glucantime® (antimoniato de meglumina). Aunque no se conoce exactamente el mecanismo de acción de los antimoniales en el parásito, durante 70 años ha demostrado tener una gran eficacia en el tratamiento para esta enfermedad. pero recientemente se ha documentado resistencia del parásito, por diferentes vías, debido a la falta de adherencia al tratamiento, por falta de políticas públicas en salud para dosificar adecuadamente a las personas afectadas con esta enfermedad. Otro de los factores importantes en la resistencia farmacológica, es la condición inmunológica de los pacientes que pueden presentar resistencias incluso a los fármacos de segunda línea. Dentro de los mecanismos de resistencia relacionados con el parásito, se destaca la variación genética de algunos genes que codifican para proteínas de la membrana celular y que están involucrados en la entrada y salida del fármaco y el transporte del medicamento dentro del parásito. El gen de la AQP1 que se expresa como una proteína transmembranal que sirve de transporte del SbV, y como mecanismo de resistencia, el parásito disminuye la expresión del gen AQP1 para reducir el paso del SbV. Es por esta razón, que la identificación y el análisis de gen de la AQP1 en Leishmania braziliensis ha sido un campo poco explorado y por lo tanto, en la presente investigación se pretende analizar la función del gen de la aquaporina1 (AQP1) y su relación con la pérdida de sensibilidad a Glucantime en parásitos editados genéticamente mediante CRISPR-CAS9. El uso de herramientas de edición génica de última generación ha adquirido gran importancia en investigación en microorganismos fármaco resistentes por su versatilidad y especificidad. En la presente investigación, nos permitirá obtener parásitos genéticamente modificados con ausencia o disminución de la expresión de gen de interés AQP1. Con el propósito de evaluar el efecto de la edición génica de los parásitos de Leishmania Viannia braziliensis sobre la respuesta al Glucantime, se realizarán pruebas de susceptibilidad a los amastigotes intracelulares expuestos a diferentes concentraciones del medicamento. La manipulación exitosa de los aislados clínicos realizada por CRISPR/CAS, se evaluará mediante técnicas de PCR, RT-PCR y Western Blot, con el fin de obtener cepas mutantes nulas, que disminuyan su perfíl de susceptibilidad al Glucantime |