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BÚSQUEDA DE NUEVAS DIANAS TERAPÉUTICAS EN MICOBACTERIAS: Implementación de las ATPasas de membrana en la resistencia antibiótica e infección latentes – tercera fase
Resumen
A nivel mundial, la incidencia de la tuberculosis (TB) ha aumentado cada año. Según el último reporte de la organización mundial de la salud (OMS) en el 2009 se presentaron cerca de 9,4 millones de nuevos casos (OMS, 2010). La infección de Mycobacterium tuberculosis, agente etiológico de la TB, se incrementado con la coinfección VIH-TB y con el surgimiento de cepas resistentes a compuestos farmacológicos antituberculosos de primera y/o segunda línea, lo cual dificulta su control (OMS, 2010). En general M. tuberculosis se propaga vía aerosoles desde un individuo infectado a otro sano. Una vez el bacilo es inhalado, este se localiza en los alveolos pulmonares, donde son fagocitados por los macrófagos alveolares. A diferencia de la mayoría de bacterias que mueren rápidamente después de la fagocitosis, las cepas virulentas de M. tuberculosis interfieren con la señalización del hospedero y previenen la maduración del fagosoma. Sin embrago, la micobacteria debe enfrentarse a diferentes condiciones de estrés como bajos niveles de nutrientes y oxígeno, y altos niveles de intermediarios de nitrógeno y oxigeno reactivo (Ward et al, 2008); Y aun así logra responder de manera efectiva a estas condiciones evadiendo el ataque del sistema inmune. Actualmente la infección de la TB se trata con la quimioterapia, pero este tratamiento ha provocado la aparición de cepas multiresistentes, como un efecto secundario de la exposición prolongada y al uso de varios fármacos. Estos agentes químicos ejercen una presión sobre el bacilo tuberculoso, haciendo que desarrolle mutaciones en aquellos genes que codifican las dianas de estos fármacos o las enzimas que activan los profarmacos (OMS, 2010; Coll, 2009; Martín, 2006). El fenómeno de resistencia en las micobacterias se ha centrado en la acción de las bombas de eflujo y varias enzimas presentes en la membrana celular, entre ellas bombas se encuentran las ATPasas tipo P, que se encargan de la homeostasis , la desintoxicación celular y en algunos casos son consideradas como factores de virulencia (Ward et al,2010). En el genoma de M.tuberculosis se reportan un gran número ATPasas tipo P (11 en total; http://www.traplabs.dk/patbase/) en comparación con otros sistemas bacterianos, lo cual da un indicio que estos sistemas proteicos son importantes para la viabilidad del bacilo en condiciones de estrés. Dentro de la subfamilia de ATPasas se agrupan las bombas que se encargan de catalizar la translocación de metales de pesados, comúnmente son referenciadas como ATPasas tipo P1B. Ellas tienen la función de tomar, compartimentalizar, y expulsar los metales en la célula. Filogenéticamente la subfamilia P1B es dividida en bombas que transportan iones monovalentes (Cu+, Ag+) y divalentes (Cu2+, Zn2+, Co2+, Pb2+, Cd2+; Palmgren y Nissen, 2011). También pueden ser clasificadas en cuatro subgrupos dependiendo del ion que transportan y algunos motivos en las secuencias transmembranales (Chintalapati et al, 2008; Futai, 2004). Asimismo se ha encontrado que algunos de los genes que codifican estas bombas pueden ser transferidos horizontalmente, ya que han sido hallados en plásmidos (Martinez et al, 2006). Como el transporte de iones metálicos interviene en la adaptación a la supervivencia intracelular y la replicación de células patógenas (Agranoff y Krishna, 1998), las ATPasa tipo P deben tener un papel importante en la importación y exportación de metales esenciales y tóxicos. Esta función se corrobora con el reciente reporte sobre la relación de CtpV (una ATPasa tipo P encargada del transporte de cobre en M. tuberculosis; Ward et al, 2010) con la virulencia del bacilo tuberculoso. También se ha encontrado que en otros sistemas bacterianos que las ATPasas tipo P1B encargadas del transporte de zinc son importantes para su patogénesis. La importancia de estos transportadores de iones metálicos en la célula, se puede ver reflejado en la regulación del contenido intracelular de cobre para la supervivencia de la micobacteria dentro del macrófago. Este metal es uno de los más utilizados por el macrófago para controlar algunos patógenos intracelulares, mediante mecanismos tales como: la creación de especies de oxigeno reactivo vía estrés oxidativo, desnaturalización de proteínas (por la interacción entre el cobre y los grupos tiol), inactivación de enzimas por la sustitución de otros biometales, y desestabilización de membrana (Ward et al, 2010). La capacidad de este metal como bactericida en M. tuberculosis se evidencia por su concentración mínima inhibitoria que es <25 &#956;M, la que es muy baja en comparación con otras bacterias. Se ha determinado que los niveles intrafagosomales de este metal varían de de 25 a 500 &#956;M, siendo esta última toxica para el bacilo (Ward et al, 2008). Al igual que el cobre la interacción hospedero-patogeno en respuesta a otros biometales se considera relevante en la infecciones bacterianas (Ward et al, 2010), por ello conocer estos sistemas de transporte en el bacilo tuberculoso ayuda a comprender mejor los mecanismo efectivos que tiene para evadir el sistema inmune. El presente proyecto hace parte de un proyecto global del grupo de Investigación Bioquímica y Biología Molecular de las Micobacterias (COL 0056963) titulado Búsqueda de Nuevas Dianas Terapéuticas en Micobacterias: Implicación de las ATPasas de Membrana en la Resistencia Antibiótica e Infección Latente. Y se fundamenta en recientes hallazgos que indican que la ATPasa tipo P codificada por el gen ctpA se expresa durante la infección del bacilo tuberculoso en humanos (Kumar et al, 2011). En la actualidad este gen y su proteína codificante no han sido caracterizados. Para ello, se pretende identificar y estudiar el gen ctpA en M.tuberculosis H37Rv (cepa virulenta de referencia) con alta probabilidad de codificar para las ATPasas tipo P de metales pesados, con el fin de conocer si este sistema de transporte juega un papel importante en la interacción hospedero-patógeno, para saber si es posible considerarse como una diana terapéutica para el control de la TB.
Convocatoria
Nombre de la convocatoria:Proyectos Jornada Docente
Modalidad:Proyectos Jornada Docente
Responsable