A pesar de que una de cada dos personas en el mundo ha recibido la vacuna BCG (vacuna actualmente disponible para prevenir la tuberculosis (TBC)), se calcula que un tercio de la población mundial esta infectada con Mycobacterium tuberculosis (Mtb). Esto hace de la TBC un problema de salud pública mundial y el desarrollo de nuevas vacunas, ayudas diagnosticas y la indentificación de marcadores biológicos de resitencia o suceptibilidad a la TBC prioridades importantes de investigacion. El desarrollo de mejores vacunas y nuevos metodos diagnosticos no será posible sin el conocimiento claro de los fundamentos sobre los que reposa la inmunidad al Mtb. Clásicamente, se ha considerado que la apoptosis de macrofagos infectados con Mtb es un mecanismo de inmunidad innata de resistencia a la TBC y que la respuesta de linfocitos T CD4 (LT-CD4+) productores de IFN-g es un indicador sugestivo de inmunidad adaptativa contra el bacilo; sin embargo, si existe relación entre el tipo de muerte celular inducida por el bacilo en monocitos y el desarrollo de la inmunidad adaptativa no ha sido aun explorado. A pesar de que clasicamente se ha considerado a la apoptosis un tipo de muerte que genera tolerancia inmunologica, recientemente se ha reportado un tipo de apoptosis proinflamatoria denominada piroptosis importante en la inmunidad a algunos patógenos intracelulares (Salmonella typhimurium y Shigella flexneri). De otra parte, varios estudios han reportado que la expresión de calreticulina (CRT) y la secrecion de la proteina High Mobility Group Box 1 (HMGB1) son marcadores sugestivos de un tipo especial de apoptosis que genera inflamación que es importante para a generar inmunidad a los tumores. Teniendo en cuenta estos antecedentes y para tratar de establecer una relacion entre la importancia la muerte celular y la adquision de inmunidad adaptativa a Mtb, en este proyecto se explorara si Mtb induce piroptosis en monocitos de sangre periferíca y/o si al morir estas células expresan CRT/HMGB1. Una vez establecido el tipo de muerte inducida por Mtb en monocitos en cada individuo del estudio se cotejara si el tipo de muerte inducido por Mtb en monocitos esta relacionado o no con la capacidad de linfocitos T del mismo individuo de producir IFN-g en respuesta a antigenos exclusivos de la micobacteria. El tipo de muerte celular sera analizado por citometria de flujo y la produccion de IFN-g (un indicador de inmunidad adaptativa al bacilo) sera cuantificado mediante la prueba de Quantiferon Gold (QFN-G).
Para explorar la relación entre inmunidad innata y adaptativa se invitará a participar a un grupo de 48 individuos sanos quantiferon POSITIVOS (n=12) y NEGATIVOS (n=36). Una prueba QFN-G positiva (QFN-G+) en un individuo sano será considerada sugestiva de inmundad adaptativa a Mtb. El tipo de muerte (necrosis, piroptosis o apoptosis inmunogenica) inducido en monocitos por antigenos del bacilo se establecera por citometría de flujo. La expresión de Anexina V+/IP- o Anexina V+/IP+ en monocitos tratados sera sugestivo de muerte por apoptosis y necrosis respectivamente. La deteccion en monocitos tratados de la expresión de CRT+ en superficie por citometria de flujo y altos niveles de HMGB1 e IL-1b/IL-18 detectados por ELISA en sobrenadante de monocitos tratados seran sugestivos de muerte por apoptosis de tipo inmunogenico y piroptosis respectivamente. Finalmente una vez establecido el tipo de muerte inducido por antigenos del bacilo en monocitos estos datos se contrastarán con la produccion de IFN-g en el individuo el cual fue cuantificado previamente mediante la prueba de QFN-G.
Hipotesis de trabajo: monocitos de personas con QFN-G positivo en presencia de sonicado de MTB mueren por apoptosis del tipo piroptosis, expresan en superficie calreticulina y/o secretan HMGB1, lo cual promueve una adecuada estimulación de los linfocitos T productores de IFN-g que se evidencia en una prueba de QuantiFERON®-TB Gold positivo.
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