La leishmaniasis es una enfermedad infecciosa que afecta a 12 millones de personas en regiones tropicales y subtropicales del planeta. Los agentes causantes de esta patología son diversas especies de parásitos intracelulares pertenecientes al género Leishmania. El parásito ingresa en el hospedero mamífero en forma de promastigote, es fagocitado por células del sistema fagocítico mononuclear y sufre un proceso de diferenciación hacia el estado intracelular obligado llamado amastigote. Una vez el parásito está en el interior de la vacuola parasitófora del macrófago, éste es capaz de modular algunas vías de señalización intracelulares de la célula hospedera para su propio beneficio y supervivencia. Nuestro grupo de investigación tiene como objetivo evaluar la función de genes del macrófago durante el transcurso de la infección con L. braziliensis. Para lograrlo, se ha venido trabajando en la implementación de un modelo de silenciamiento genético inducible por tetraciclina (Tc). Este modelo se fundamenta en la capacidad de una proteína (denominada represor de tetraciclina, TR) de regular la expresión de genes corriente abajo de elementos genéticos reguladores a los que se une esta proteína. En ausencia de tetraciclina, el TR se encuentra unido a la región operadora del DNA corriente arriba de la secuencia codificante para un miRNA. Bajo estas condiciones el TR impide que la RNA polimerasa transcriba el miRNA. Por el contrario, en presencia de tetraciclina, ésta se une al TR ocasionando que se libere de su sitio de unión al DNA y por lo tanto permitiendo que la RNA polimerasa realice la transcripción del miRNA. De esta forma la tetraciclina es usada como un inductor de la expresión de un miRNA usado para silenciar un gen de interés. Hasta el momento hemos generado líneas celulares derivadas de la línea U937 con expresión constitutiva de la proteína TR. Contamos con 4 líneas sometidas a 1, 2, 3 o 4 rondas de infección con vectores lentivirales portadores del constructo codificante para TR. De éstas, la línea celular transducida 4 veces con vectores lentivirales codificantes para TR (células U937-4TR) será el modelo celular que se use para el silenciamiento genético inducible. En este proyecto se plantea la caracterización de esta línea celular desde el punto de vista funcional como macrófagos y desde el punto de vista de regulación de expresión génica. Una vez caracterizada, esta línea celular se constituirá en una herramienta biológica muy útil para el estudio sistemático no sólo de la interacción macrófago-Leishmania, sino de la biología celular del macrófago en general.