La yuca (Manihot esculenta Crantz) es un alimento básico, consumido por cerca de 800 millones de personas alrededor del mundo por su alto contenido energético. Sin embargo, una de las limitaciones de este cultivo es la bacteriosis vascular generada por la bacteria Xanthomonas axonopodis pv. manihotis (Xam). Xam es una bacteria que utiliza proteínas efectoras similares a activadores transcripcionales (TALEs) para activar genes de susceptibilidad en la planta. Sin embargo las plantas emplean este mecanismo de la bacteria para activar genes de resistencia (genes ejecutores) y asi contener la colonización del patógeno. En Xam se ha identificado el repertorio de TALEs presentes en diferentes cepas y se ha identificado un gen de susceptibilidad, sin embargo no se conocen hasta el momento genes ejecutores. Por esta razón, este trabajo esta dirigido hacia la búsqueda de candidatos a genes ejecutores mediante el uso de RNAseq como herramienta transcriptomica. La estrategia que se utilizará para alcanzar este objetivo será seleccionar el ó los TALEs capaces de activar una respuesta hipersensible o una reacción de resistencia en variedades particulares de yuca. Para ello se evaluará el efecto de un TALE especifico presente en una cepa de Xam en planta mediante inoculación de esta cepa en un set de alrededor 3-5 variedades de yuca y se realizarán curvas de crecimiento bacteriano y/o evaluación de sintomas. Una vez determinado el fenotipo de resistencia en una variedad particular, se procederá a realizar un perfil de expresión génica mediante RNAseq de plantas de yuca inoculadas con la cepa que posee el TALE seleccionado. Los perfiles de expresión génica obtenidos serán comparados para obtener aquellos genes sobreexpresados y los genes candidatos serán comparados con los blancos predichos de ese TALE en particular mediante herramientas bioinformáticas. Los genes candidatos seleccionados serán validados mediante qRT-PCR. Finalmente una vez conocida la secuencia del gen y su promotor se diseñaran TALEs artificiales (arTALEs) dirigidios para inducir la expresión del gen ejecutor. Estos arTALEs serán introducidos en una cepa de Xam virulenta carente del TAL que genera la inducción del ejecutor. Se inocularán plantas de una variedad susceptible a esta cepa. Se espera que el arTALE pueda inducir la expresión del gen ejecutor y se genere resistencia. |