--La viroterapia oncolítica utiliza virus con ciclo viral activo selectivo de un tumor, capaz de liberar miles de partículas virales que infecten otras células tumorales vecinas (2). El posible virus oncolítico debe cumplir con ciertas condiciones para poder ser usado como virus oncolítico entre las condiciones se tiene: 1. Ser selectivo del tejido tumoral, 2. Fuerte potencial citolítico, con baja toxicidad en células no tumorales, 3. Potencial para ser aplicado sistémicamente sin efectos diversos, 4. Ciclo de replicación y propagación rápida, 5. la accesibilidad a ingeniería genética, 6. Fácil fabricación y de alto título de stock, 7. disponibilidad de agentes antivirales, para controlar la propagación viral no de deseada, 8. Estabilidad genética, 9. Inmunidad pre-existente, y 10. La estimulación de la inmunidad antitumoral (2). provechando la información obtenida de otras investigaciones, como las realizadas sobre el Reovirus (3), en las que se usan las partículas virales para la infección de diferentes líneas celulares de origen tumoral
e inhibición del crecimiento metastacico de diferentes tumores aumentando así la expectativa de vida de pacientes sometidos a tratamientos con Reovirus (4, 5, 6). El Rotavirus es un virus lítico perteneciente a la familia Reoviridae, a la cual también pertenece el Reovirus, es un virus no envuelto con morfología icosaédrica y un tamaño que oscila entre 60 y 80nm (7). El Grupo de Investigación de Biología Molecular de Virus de la Facultad de Medicina de la Universidad Nacional de Colombia, aisló rotavirus con capacidad Oncolítica, replicando rotavirus en líneas tumorales. Uno de esos aislados, el rotavirus WTEW y WT1-5 requieren estudios para determinar su capacidad oncolítica. Por esto, el presente estudio cultivará las líneas tumorales MDA y MCF-7 de cáncer de seno bajo condiciones ideales. Se purificara el virus mediante CsCl, luego se establecerá la concentración viral adecuada (MOI) para la infección de esta línea celular, mediante inmunocitoquimica. Se evaluara la infección celular en ensayos de inmunofluorescencia, inmunohistoquímica y ELISA, con anticuerpos dirigidos contra las proteínas estructurales del virus. Se incubarán las células tumorales CF-7 o MDA con los inhibidores de HSPs (Hsp90 y Hsp70) y se analizará el efecto en la infección de los aislamientos WTEW o WT1-5. Finalmente se establecerá la participación de las proteínas de choque térmico Hsp90, Hsp70, Hsp60 y Hsp40 como posibles receptores en esta línea celular mediante ensayos de bloqueo incubando primero las células con la porción Fab de anticuerpos anti-HSPs y luego se infectará con rotavirus. La infección se evaluará mediante nmunocitoquimica e Inmunofluorescencia. |