La microelectroforesis es una técnica que permite estimar la carga de las partículas dispersas en un medio, mediante la respuesta generada por un campo eléctrico externo. Esta técnica se ha aplicado a bacterias Gram positivas y Gram negativas, obteniéndose resultados reproducibles de movilidad electroforética que aportan información relevante sobre la carga superficial de las bacterias y su relación con la naturaleza de la misma. Sin embargo, hasta el momento existe muy poca información sobre su utilidad en el estudio de la carga superficial de las micobacterias.
El objetivo principal de este trabajo es determinar la movilidad microelectroforética de micobacterias de crecimiento rápido (Mycobacterium smegmatis mc2155) y lento (M. bovis BCG, M. tuberculosis H37Ra y H37Rv), aplicando parámetros óptimos importantes como voltaje, tiempo, concentración celular, naturaleza del medio dispersor, etc., y así obtener valores de movilidad electroforética y potencial zeta de la superficie micobacteriana.
Por otra parte, estudios preliminares de tinción de micobacterias con el indicador rojo neutro (test de rojo neutro), sugieren una relación directa entre la virulencia y la coloración roja que toman las micobacterias al contacto con el colorante en medio alcalino. Se ha postulado que la composición en glicolípidos de carácter ácido en la envoltura de las cepas virulentas, aporta protones al rojo neutro que le hacen virar a rojo en condiciones alcalinas del test de rojo neutro. Hasta la fecha no se han realizado estudios para determinar el carácter ácido, o la carga de la superficie de las micobacterias virulentas que expliquen los resultados del test de rojo neutro. De acuerdo a lo anterior, la determinación de la movilidad electroforética y el potencial zeta de M. tuberculosis aportarán información importante para explicar el test de rojo neutro, y se podría considerar un nuevo marcador de virulencia. Además se planea realizar un análisis bioinformático y la cuantificación de los niveles de transcripción del gen Rv0577 asociado a la virulencia en M. tuberculosis empleando como control negativo la M. smegmatis. |