Uno de los problemas de salud pública que ha centrado los esfuerzos de múltiples grupos de investigación en el mundo es el Cáncer (Ca). Se estima que en Colombia en los próximos años, el 5% de la población podrá padecer la enfermedad. La historia natural, así como la localización anatómica y los índices de mortalidad, difieren entre los diversos tipos de carcinomas hasta ahora descritos. Uno de los más agresivos, y de mayor mortalidad, es el Ca pulmonar, para el cual se han desarrollado nuevas moléculas terapéuticas, así como nuevas herramientas diagnósticas que permiten su detección temprana y posibilitan un mejor pronóstico. No obstante, los resultados del tratamiento de pacientes sometidos a esquemas de radioterapia y quimioterapia, muestran en un porcentaje no superior al 25%, una sobrevida de 5 años (Hirchowitz EA y col, 2004). La dificultad para obtener un tratamiento con mayor eficacia, radica entre otros, en que se cuenta con un limitado número de marcadores que faciliten la detección temprana, la evaluación de la manifestación pre-neoplásica y que apoyen la selección del tratamiento más adecuado en función de las propiedades biológicas de cada tumor. Dada su baja inmunogencidad, el Ca pulmonar de célula no pequeña (CNP), al igual que otros tipos histológicos del mismo origen, tiene la capacidad de evadir la respuesta inmune antitumoral efectiva (Raez EL y col, 2004). La activación de una respuesta efectiva, puede inducirse in vitro e in vivo, con la administración de inmunopotenciadores, moléculas como citoquinas o sistemas más complejos, como las células dendríticas (CDs). Estas últimas, han sido empleadas en diversos protocolos clínicos, como herramienta terapéutica para el control de múltiples neoplasias. Sin embargo, y antes de pasar a fases pre-clínicas y clínicas, las CDs autólogas, han debido demostrar su inmunogenicidad in vitro, que si bien, no es del todo extrapolable, sí permite determinar patrones de activación celular, requeridos en control de las neoplasias (Actividad de linfocitos CD8+ y CD4+, por ejemplo). En este proyecto, se propone el uso de CDs autólogas humanas para: (i) Estandarizar las condiciones de cultivo in vitro que permitan la diferenciación óptima de monocitos a CDs maduras con capacidad de promover una respuesta humoral y celular antígeno-específica en pacientes con Ca pulmonar, (ii) Buscar moléculas inmunomoduladoras tendientes a favorecer fenotipos protectores a partir de CDs pulsadas con antígenos tumorales y (iii) Caracterizar cada línea celular derivada de tumores pulmonares en función de estatus de metilación aberrante del promotor en los genes supresores tumorales p16, TIMP 2 y TIMP 3. Planteamiento del problema: Uno de los problemas de salud pública que ha centrado los esfuerzos de múltiples grupos de investigación en el mundo es el Ca. Se estima que en Colombia en los próximos años, el 5% de la población padecerá la enfermedad. La historia natural, así como la localización anatómica e índices de mortalidad, difieren entre los diversos tipos de carcinomas hasta ahora descritos. Uno de los más agresivos, y de mayor mortalidad, es el Ca pulmonar, para el cual se han desarrollado nuevas moléculas terapéuticas, así como herramientas diagnósticas que permiten su detección temprana que posibilitan un mejor pronóstico. No obstante, los resultados del tratamiento de pacientes sometidos a esquemas de radioterapia y quimioterapia, muestran en un porcentaje no superior al 25% y una sobrevida de 5 años (Hirchowitz EA y col, 2004). La dificultad para obtener un tratamiento con mayor eficacia, radica entre otros, en que se cuenta con un limitado número de marcadores que faciliten la detección temprana, la evaluación de la manifestación pre-neoplásica y que apoyen la selección del tratamiento adecuado en función de las propiedades biológicas del tumor. Dada su baja inmunogenicidad, el Ca pulmonar de célula no pequeña (CPCNP), al igual que otros tipos histológicos del mismo origen, tiene la capacidad de evadir la respuesta inmune antitumoral efectiva (Raez EL y col, 2004). La activación de una respuesta efectiva, puede inducirse in vitro e in vivo, con la administración de inmunopotenciadores, moléculas como citoquinas o sistemas más complejos, como las CDs. No obstante, esta respuesta mediada por células presentadoras de antígeno (CPA) puede ser modulada negativamente por antígenos tumorales, limitando de este modo, el resultado terapéutico de las CDs. Estudiar marcadores tempranos de neoplasias y la alteración de la diferenciación de CDs por tumores, buscando moléculas que reviertan esta modulación negativa, permitirá profundizar en la inmunología tumoral, diseñando esquemas inmunoterapéuticos basados en CDs más efectivos. Justificación: La utilización de CDs en estudios in vitro y ex vivo ha permitido comprender mejor los mecanismos involucrados en el desarrollo de una inmunidad protectora contra células neoplásicas. No obstante, la limitación de algunos de estos esquemas de tratamiento son atribuidos a “defectos” en la diferenciación de las CDs, los cuales son determinantes mecanismos de evasión del sistema inmune por parte de antígenos tumorales. Adicionalmente, el número de marcadores tumorales resulta limitado, minimizando la posibilidad de controlar la progresión del tumor en etapas tempranas de desarrollo. El lograr revertir esta alteración, empleando moléculas solubles (citoquinas y anti-citoquinas, por ejemplo) y monitoreando marcadores moleculares asociados al tumor, permitirá identificar factores que favorezcan una mejor respuesta in vivo, permitiendo que CDs autólogas pulsadas con antígenos tumorales sean utilizadas como vacuna, en protocolos clínicos de inmunoterapia no convencional mucho más efectivos. Las CDs serán diferenciadas a partir de monocitos periféricos humanos, mediante el tratamiento in vitro con citoquinas recombinantes (Delgado G y col, 2003). Estas células serán maduradas y pulsadas con antígenos tumorales provenientes de diversas fuentes (líneas celulares establecidas de cada paciente, líneas celulares de referencia ó lisado de tumor). La respuesta celular será evaluada mediante el estudio de las sub-poblaciones CD4+ y CD8+ de sangre periférica y el perfil de citoquinas producido por cada una de las poblaciones. El análisis de la conjugación de las variables (CDs, inductor de maduración, molécula moduladora, antígeno y marcadores moleculares) permitirá establecer cuales factores pudieran revertir el fenotipo inmunosupresor del tumor, favoreciendo la actividad celular específica asociada al control de la neoplasia y/ó a la progresión de metástasis.