El oftalmólogo en su práctica diaria se enfrenta a patologías que afectan la superficie ocular y la transparencia corneal, con pérdida funcional de la visión. Muchas de éstas ocurren debido a la pérdida de células caliciformes conjuntivales, esenciales para mantener la humedad, nutrición y transparencia corneal. Las opciones terapéuticas disponibles, no han podido reemplazar a las células caliciformes ni restaurar su funcionalidad, lo cual repercute en los resultados de procedimientos que buscan mejorar la transparencia corneal, como el trasplante de córnea, ya que fracasan si no se cuenta con una adecuada película lagrimal. El reemplazo de tejidos y células dañadas o perdidas, se ha convertido en una alternativa gracias al avance en técnicas de cultivo celular y al desarrollo de la ingeniería de tejidos. Explorar las opciones terapéuticas fundamentadas en estos campos, con el propósito de reconstruir zonas de la conjuntiva en las que las células caliciformes se encuentren afectadas, puede ser una opción para mejorar el microambiente del segmento anterior y así hacer apto al paciente para procedimientos que mejoren su calidad visual. La OMS considera la ceguera por alteraciones de la cornea como la cuarta causa de ceguera global (5.1%), después de la catarata, glaucoma y degeneración macular relacionada con la edad. Las terapias disponibles (transplantes autólogos de conjuntiva o mucosa oral, transplantes homólogos de conjuntiva e injertos de membrana amniótica) poseen múltiples limitaciones y no logran en la mayoría de los casos, evitar la pérdida funcional de la visión. Este trabajo busca estandarizar la metodología para aislar, cultivar y co-cultivar células caliciformes y fibroblastos de conjuntiva de conejos en soportes de colágeno I. Igualmente, caracterizar inmunohistoquímicamente los cultivos desarrollados y establecer su funcionalidad. En el estudio se emplearán conejos machos New-Zeland entre 1500 y 2000 g comofuente de las células. El sacrificio de los animales se realizará en la sala de eutanasia del bioterio del Departamento de Farmacia, aplicando una solución concentrada de anestésicos no inhalantes tipo barbitúricos intravenosamente a nivel de la vena marginal de la oreja. Los fondos de saco y las membranas nictitantes serán resecados y el tejido será seccionado en fracciones (explantes) de 1-mm3, que serán sembradas sobre platos de cultivo. Una vez los explantes se hayan adherido a la superficie, se adicionará medio RPMI -1640 con 10% de suero fetal bovino (SFB), L-glutamina y penicilina-estreptomicina. Las células serán incubadas en atmósfera húmeda con 5% CO2 a 37°C, hasta obtener monocapas confluentes. Posteriormente, se desarrollarán los co-cultivos de fibroblastos y células caliciformes en soportes de colágeno tipo I y finalmente se realizará la evaluación histoquímica e inmunohistoquímica de los mismos. En este proceso se generarán las propuestas investigativas que permitan la formación y consolidación de una línea de investigación dedicada a la elaboración de sustitutos de tejidos oculares, en el Grupo de Trabajo en Ingeniería de Tejidos (COL0011106), en la que participen la Unidad de Oftalmología de la Facultad de Medicina y el Departamento de Farmacia, de la Universidad Nacional de Colombia. El desarrollo de esta propuesta contribuirá con la iniciativa global de la OMS de eliminar la ceguera en el 2020.