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Estudio preliminar de la expresión de un fragmento de la proteína hipotética PFL1395c de Plasmodium falciparum en un sistema heterólogo
Resumen
La malaria o paludismo es una enfermedad de amplia distribución mundial causada por parásitos del género Plasmodium, la cual es transmitida al ser humano por la picadura del hembra infectado del género Anopheles. Una de las especies con mayor relevancia es Plasmodium falciparum, debido a sus altos índices de morbilidad y mortalidad en el mundo. El genoma de este parásito contiene 14 cromosomas y 5.365 genes, de los cuales solo a 1.817 genes se les conoce sus funciones. El objetivo del presente trabajo consiste en expresar fragmentos de la proteína PFL1395c. inicialmente se obtendrá y purificará de manera preliminar un fragmento de la proteína hipotética PFL1395c expresada en un sistema heterólogo. La metodología consiste en obtener el fragmento de cADN que se encontró en estudios previos clonado en el fagémido pBlueScript y que además, es un fragmento que está sub-clonado en el vector de expresión pGEX-4T-3. Se partirá de las secuencias de los clonos, que tienen el fragmento sub-clonado en el vector pGEX-4T-3, estos plásmidos serán purificados y sus secuencia se analizarán, dicho DNA se utilizarán para transformar células de E. coli BL21 (DE3) competentes. Estas células serán cultivadas y la expresión de la proteína recombinante se inducirá con isopropil-Beta-D-1-tiogalactopiranósido (IPTG) y el producto expresado se analizará mediante electroforesis en geles de poliacrilamida. Asimismo se hará western blot y para el inmunoensayo se usará el anticuerpo monoclonal 7 (AcM7), como anticuerpo primario para detectar el fragmento de la proteína expresada. Necesitamos a través de este proyecto también conocer la secuencia del AcM7 a partir de las células de hibridoma que serán descongeladas y activadas para ser enviadas para obtener la secuencia del AcM7 secretado por el hibridoma mediante un servicio externo. El estudio del fragmento de la proteína PFL1395c de P. falciparum sub-clonado en el vector pGEX-4T-3 y su posible expresión en las células hospederas BL21 (DE3) permitirá además de comprobar la existencia de PFL1395c, a través de uno de sus fragmentos reconocido por el AcM7 y podrá aportar información sobre su estructura, y posible función; de igual manera, con esta investigación se conseguirá dar continuidad del proceso relacionado con la búsqueda de una patente y al conocimiento acerca del proteoma de P. falciparum, ya que la información que se tiene de las proteínas de este parásito es limitada.
Convocatoria
Nombre de la convocatoria:Convocatoria externa
Modalidad:Convocatoria externa
Responsable