El linaje Beijing fue descrito en 1995 por Van Soolingen y col a partir de un análisis poblacional de los genotipos circulantes en la República de China, Mongolia, Corea del sur y Tailandia (4). Frecuentemente este genotipo se asocia con resistencia a medicamentos, transmisión activa de la enfermedad, brotes de TB, alta virulencia y se considera un factor de riesgo importante del fracaso de los tratamientos y recaídas. En Colombia, el primer reporte de este genotipo se realizó en 1998 en aislados clínicos de pacientes provenientes de Buenaventura (Valle del Cauca) (5). En 2010 Murcia y col (6)., reportaron el primer caso de TB-MDR en Bogotá causado por este genotipo en una niña proveniente de Buenaventura, quien falleció. De acuerdo a la prueba Spoligotyping se evidenció que el agente causal de TB en esta niña pertenecía al genotipo Beijing, pero con ausencia adicional del espaciador número 40, por lo que se describió como genotipo Beijing-Like SIT 190 (6,7). La cepa causante de este cuadro clínico se identificó con el número 323 y su genoma fue secuenciado recientemente confirmando que es una cepa XDR (8), por lo que se presume que es altamente virulenta, predomina en el país superando el genotipo Beijing clásico y se constituye como una patógeno emergente, representando una grave amenaza para la salud pública nacional (8). Este genotipo se está propagando rápidamente ocupando el tercer lugar en cepas de M. tuberculosis MDR (9). La presente propuesta tiene como Objetivo General: Caracterizar la virulencia y la respuesta inmune in vivo de Mycobacterium tuberculosis genotipo Beijing-like cepa 323 a partir de la infección del modelo de tuberculosis pulmonar progresiva “ratón BALB/c” y analizar la expresión diferencial de genes determinantes de virulencia en fase aguda y crónica de la enfermedad en el animal y como objetivos Objetivos específicos: (i) - Evaluar en el modelo animal de tuberculosis progresiva “ratón BALB/c” los hallazgos fenotípicos de la virulencia de Mycobacterium tuberculosis genotipo Beijing -like cepa 323 (ii) – Determinar la expresión diferencial de genes asociados a virulencia en fase aguda y crónica de la infección en ratón BALB/c por Mycobacterium tuberculosis genotipo Beijing-like cepa 323 a partir del análisis global de expresión por medio de la secuenciación de RNA (RNAseq) . Para alcanzar los objetivos propuestos se empleará la metodología estandarizada por Hernández-Pando (10) brevemente Objetivo 1: (i) Infección experimental de ratones BALB/c por infección intratraqueal con las cepas control de Mtb y de la cepa Beijing-like seleccionada para el estudio; (ii) seguimiento, evaluación de estado de salud y sacrificio de animales a los 1, 3, 14, 21, 28, 60, 90, 120 post infección; (iii) extracción de bazos, pulmones e hígados para realizar el recuento de UFC a partir del homogenizado y siembra en medios sólidos; (iv) con otra parte de los órganos del animal se realizarán cortes para Histopatología e inmunohistoquímica. (V) La medición de expresión de citoquinas INF-γ TNF-α iNOS TGF-β IL-4 IL-10, por medio de RT-PCR a partir del cDNA de tejidos infectados. Objetivo 2: En Fase aguda (Día 14) y fase crónica (Día 60) se extraerá RNA de tejidos infectados con Mycobacterium tuberculosis Beijing-like y se obtendrá el cDNA para la realización de qRT-PCR de los genes: Icl1, rpfE, pcaA, mmpl7, pcnA, choD, dosR, sigA, katG, pknG, whiB3, y ESAT6, para verificación de obtención de cDNA suficiente para la posterior secuenciacion de transcriptoma completo. Los resultados esperados son: i Comprobación de la alta virulencia de la cepa 323; ii Expresión diferencial de los genes claves determinantes de virulencia; iii regulación negativa de los genes asociados al control de la enfermedad; iv respuesta inmune desencadenada por la infección in vivo no protectora, v nuevo conocimiento de uno de los genotipos más virulentos que circulan en el país.