La tuberculosis (TB) continúa como una de las principales causas de mortalidad en el mundo. La actual pandemia de TB ha surgido por la aparición de cepas resistentes a los medicamentos anti-TB tradicionales, la coinfección con el virus de inmunodeficiencia humana (VIH) y la baja eficiencia de la actual vacuna BCG, la que resulta efectiva contra la TB miliar y meníngea en niños, pero con eficacia cuestionable (entre el 0 y 80%) en el control de la TB pulmonar en adultos. La identificación de nuevos biomarcadores relacionados con la virulencia de M. tuberculosis es una de las estrategias recomendadas por la Organización Mundial de la Salud para para el diseño racional de nuevas vacunas anti-TB. Utilizar cepas vivas de M. tuberculosis atenuadas como vacuna es muy recomendable, toda vez que incluyen antígenos inmunodominantes importantes como ESAT-6, CPF10, Ag85, etc., (ausentes en BCG) que generan una respuesta celular más robusta y específica[1], [2]. Estudios previos muestran la importancia de las proteínas de membrana ATPasas tipo P, en la virulencia y viabilidad del bacilo tuberculoso, debido a su papel en el mantenimiento de la homeostasis celular. Nuestro grupo de investigación “Bioquímica y Biología Molecular de las Micobacterias-(BBMM)” de la Universidad Nacional de Colombia, ha sido pionero en el estudio del transporte iónico mediado por ATPasas tipo P en las micobacterias. En una primera fase de este proyecto estudiamos la especificidad iónica de diferentes ATPasas Tipo P de M. tuberculosis, y su potencial como dianas terapéuticas y/o de atenuación del bacilo tuberculoso. En la actualidad, tenemos el interés conocer si el transporte de calcio (metal alcalinotérreo) y el de cobre (metal pesado) mediado por ATPasas tipo P de la membrana plasmática están relacionados con la virulencia de M. tuberculosis (Tesis doctorales en marcha). En esta nueva fase o presente proyecto, se propone la construcción de un mutante de M. tuberculosis defectivo en el transportador de cobre en la membrana plasmática CtpA (objetivo específico 1), además de la comparación preclínica en modelo celular (objetivo específico 2) y murino (objetivo específico 3), de la virulencia y respuesta inmune entre mutantes de M. tuberculosis H37Rv defectivos en el transporte de calcio y cobre de la membrana plasmática, mediados por las ATPasas tipo P, CtpF y CtpA, respectivamente. También se propone evaluar mediadores solubles asociados con el cinética de infección de las cepas de M. tuberculosis probadas. El objetivo final es seleccionar cuál de las cepas de M. tuberculosis modificadas genéticamente muestra la mejor atenuación. Hacia futuro se plantea utilizar la cepa seleccionada como base para la construcción de un doble mutante junto al transportador MmpL7 (mutación no relacionada) descrito previamente como un reconocido factor de virulencia de M. tuberculosis e implicado en la biosíntesis del lípido de pared celular dimicocerosato de tiocerol (PDIM), lo que garantizaría la no reversión del fenotipo atenuado[3]. Los útiles génicos necesarios para introducir esta segunda mutación en MmpL7, sobre el mutante de M. tuberculosis seleccionado en este proyecto, ya han sido probados en nuestro laboratorio (Tesis de Maestría en marcha). La alianza propuesta garantizaría el cumplimiento de los objetivos propuestos toda vez que el grupo coinvestigador “Grupo de Investigación en Inmunotoxicología” de la Universidad Nacional de Colombia, tiene experiencia en análisis por citometría de flujo de mediadores solubles de infección (objetivo específico 4), y el aliado externo “Laboratorio de Patología Experimental del Instituto Nacional de Ciencias Biomédicas y Nutrición, Salvador Zubirán” de la Ciudad de México) es experto en modelos experimentales de infección tuberculosa (objetivos específicos 1 y2). La “Fundación Instituto de Inmunología de Colombia”, aportaría su infraestructura para el trabajo con cepas virulentas de M. tuberculosis (objetivo específico 1).